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技術(shù)文章

高效液相色譜儀的優(yōu)缺點及其對流動相的要求

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高效液相色譜儀也叫高壓液相色譜、高速液相色譜、高分離度液相色譜等,它是在經(jīng)典液相色譜法的基礎上,于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。
 
高效液相色譜儀的優(yōu)缺點:
 
優(yōu)點:分離效率高,選擇性好,檢測靈敏度高,操作自動化,應用范圍廣;
 
與氣相色譜法相比具有的優(yōu)點:不受試樣的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性限制,應用范圍廣;流動相種類多,可通過流動相的優(yōu)化達到高的分離效率;一般在啊室溫下分析即可,不需高柱溫。
 
缺點:分析成本高,液相色譜儀價格及日常維護費用貴,分析時間一般比氣相長。
 
高效液相色譜對流動相的要求有哪些?
 
1、純度:流動相必須用HPLC級的試劑,使用前過濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用0.45um或更細的膜過濾)。溶劑所含雜質(zhì)在柱上積累,會影響色譜柱的使用壽命。
 
2、溶解度:樣品的溶解度要適宜如果溶解度,如果溶解度欠佳樣品會在柱頭沉淀,不但影響純化分離,還會縮短柱子的使用壽命。
 
3、粘度要低(應<2cp) 高粘度溶劑會影響溶質(zhì)的擴散、傳質(zhì),降低柱效,還會使柱壓降增加,使分離時間延長。*選擇沸點在100℃以下的流動相。
 
4、樣品易于回收。應選用揮發(fā)性溶劑。
 
5、流動相:PH采用反相色譜法分離弱酸(3≤pKa≤7)或弱堿(7≤pKa≤8)樣品時,通過調(diào)節(jié)流動相的pH值,以抑制樣品組分的解離,增加組分在固定相上的保留,并改善峰形的技術(shù)稱為反相離子抑制技術(shù)。對于弱酸,流動相的pH值越小,組分的k值越大,當pH值遠遠小于弱酸的pKa值時,弱酸主要以分子形式存在;對弱堿,情況相反。分析弱酸樣品時,通常在流動相中加入少量弱酸,常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液;分析弱堿樣品時,通常在流動相中加入少量弱堿,常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。

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